22.04.1985 г. и № 8 от 19.01.1995 г. задачи по совершенствованию и

унификации диагностической базы возлагаются прежде всего на лабораторию

клинической микробиологии. Поэтому микробиологические аспекты деятельности

больничного эпидемиолога на практике сводится к организации и контролю

правильного взятия, хранения и транспортировки материала для

микробиологического исследования.

Биологический материала микробиологических методов исследования следует

брать в максимально стерильных условиях, тщательно соблюдая правила

асептики и по возможности избегая контаминации образцов микроорганизмами из

окружающей среды.

Образцы для посевов необходимо брать до начала лечения

антибактериальными препаратами или в интервалах между приёмом антибиотиков

(не менее 12 часов). Отобранный материал должен быть маркирован и как можно

быстрее доставлен в микробиологическую лабораторию. При необходимости

образцы помещают в транспортную среду. Некоторые образцы требуют хранения

при t 37°, другие – при пониженной (холодильнике).

5. В микробиологических исследованиях применяются следующие питательные

среды:

1. Для определение общего микробного числа микроорганизмов используется

чаще всего 1% пептонную воду или мясопептонный бульон (МПБ).

2. Для обнаружение стафилококков используется:

- молочно-солевой агар: к 1 л мясопептонного бульона добавляют 65 г

хлорида натрия и 20 г сухого агар-агар. Разливают по колбам и

стерилизуют при 120°С 20 мин. Перед посевом к расплавленному и

охлажденному до 45°С агару добавляют 10% стерильного молока,

равномерно смешивают и разливают в чашки Петри.

- желточно-солевой агар Чистоковича. 100 мл желточной эмульсии (один

желток, размешанный в 200 мл изотонического раствора хлорида

натрия) вливают в 300 мл расплавленного и охлажденного до 50°С

мясопептонного и разливают в стерильные чашки Петри.

- молочно-желточно-солевой агар. В 1 л дистиллированной воды

растворяют при нагревании сухой питательный агар в количестве,

указанном на этикетке банки, и 90 г хлорида натрия; разливают в

колбы, стерилизуют при 120°С 20 мин. Перед употреблением в

расплавленный и остуженный до 50°С агар добавляют 60мл стерильного

молока, один желток (тщательно разбитый стеклянными бусами с 50 мл

изотонического раствора хлорида натрия), полимиксин М 300 000 ЕД.

Среду перемешивают и разливают в чашки: по 20-25 мл для

использование при подращивании стафилококков на мебрананных

фильтрах и по 12-15 мл (тонким слоем) для прямого посева.

3. Для обнаружение бактерий группы кишечных палочек:

- используется глюкозопептонную воду (ГПС), среда Эйкмана.

Концентрированная среда: в 1 л воды растворяют 100 г пептона, 50 г

хлорида натрия, 50 г глюкоза, нагревают смесь до кипения,

фильтруют, устанавливают рН 7,4-7,6, разливают по 10 мл в колбы

(емкостью по 100-250 мл) с поплавками и по 1 мл в пробирки с

поплавками. В среду можно добавить индикатор Аедреде (кислый

фуксин, обесцвеченный щелочью) или бромтимоловый синий.

Разведенную среду глюкозопептонной воды готовят так же, как

концентрированную, но количество ингредиенов в 10 раз меньше на 1

л воды. Лактозо-пептонную среду готовят так же как ГПС, с заменой

глюкозы на лактозу. Среды стерилизуют при 112°С 12 мин.

- среду Эндо. Среду готовят из сухого порошка по прописи, указанной

на этикетке банки. Состав порошка: сухой мясо-пептонный агар,

лактоза, основной фуксин, сульфит натрия. Среду готовят в день ее

использования. Горячую среду различают в стерильные чашки Петри и

оставляют до застывания на поверхности стола. Хранить чашки со

средой можно не более 3 дней в темном месте или в холодильнике.

- среду Эндо с молоком ( по Г. П. Калине). Среду готовят из сухого

порошка, но воды берется меньше: к 90 мл среды добавляют 10 мл

стерильного молока, 0,2 мл 10% спиртового раствора основного

фуксина, 0,2 мл 5% спиртового раствора розоловой кислоты,

тщательно перемешают зоны просветления при выпадении в осадок

параказена.

- желточно-лактозный бульон с бриллиантовым зеленым. К 700 мл

дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 10 г лактозы, 200 мл

желчи, 13,3 мл 1% водного раствора бриллиантового зеленого и

доливают по 5 мл в пробирки с поплавками, стерилизуют при 112°С 12

мин.

- среду ФКП-1. Среду готовят так же, как желточнолактозный бульон,

но только лактозы берут 1 г и добовляют 1 г триптофана.

- среду Хейфеца. В 1 л воды растворяют при нагревании 10 г пептона,

5 г хлорида натрия, 5 г маннита. Устанавливают рН 7,4-7,6,

фильтруют и добавляют 10 мл 5% спиртового раствора розоловой

кислоты, 23 мл 0,1% влного раствора метиленового синего.

Стерилизуют при 100°С (текучим паром) 20 мин. Зазливают в

стерильные пробирки и скашивает со столбиком. Цвет среды

краснофиолетовый.

- среду Кесслера. К 1 л воды добавляют 10 г пептонна, 50 мл желчи,

кипятят 20-30 мин, добавляют 2,5 г лактозы, доводят объем до 1 л,

устанавливают рН 7,8-8,2 и добавляют 4 мл 1% водного раствора

генциального фиолетового. Среди разливают в пробирки с поплавками

и стерилизуют при 0,5 атм. 15 мин. Среда фиолетового цвета. Среда

применяется при исследовании почвы.

- лактозный бульон с борной кислотой

4. Для обнаружение энтерококков используется:

- щелочно-полимиксиновая среда. Приготавливают три раствора по

следущим рециптам

|Ингредиенты |Обычная |Удвоенная |

| |концентрация |концетрация |

|Раствор 1 |40 мл |70 мл |

|мясопептонный | | |

|бульон | | |

|хлорид натрия |0,5 г |1 г |

|глюкоза |1 г |1 г |

|дрожжевой экстракт |2 мл (0,2 г) |4 мл (0,4 г) |

|жидкий (или сухой) | | |

|Раствор 2 |25 мл |12,5 |

|вода | | |

|дистилли-рованная | | |

|карбонат натрия |0,53 г |1,1 г |

|Раствор 3 |0,25 г |0,5 |

|бикарбонат натрия | | |

| вода |25 мл |12,5 мл |

|дистилли-рованная | | |

|полимиксин |20000 ЕД/мл |40000 ЕД/мл |

|1,6 % спиртовый |0,5 мл |1 мл |

|раствор | | |

|бромтимоло-вого | | |

|синего | | |

Раздельно стерилизуют растворы 1, 2 и 3 при 112°С 12 мин.

Растворы смешивается, устанавливают рН 10,0-10,2, добавляют

полимиксин, бромтимоловый синий, разливают по 10, 50 и 100 мл во

флаконаы (удвоенной концентрации).

- молочно-ингибиторная среда Калины. К 85 мл стерильного

питательного агара добавляют 15 мл стерильного молока, 1,25 мл

0,01% водного раствора кристаллического фиолетового. Перемешивают

и разливают по стерильным чашкам Петри.

- желчная среда, среда Турчинского. К 600 мл дистиллированной воды

добавляют 400 мл желчи, 35-40 г сухого питательного агара, по 5 г

фосфата калия однозамещенного си двузамещенного, 5 г натрий-

аммония фосфата. Расплавляют при нагревании, разливают по флакон

и стерилизуют при 120°С 20 мин. Перед употреблением в

расплавленный остуженный агар добавляют на каждые 100 мл среды

0,5 г глюкозы, 1 мл 1% водного раствора TTX, 0,6 мл 1% водного

раствора синего, 20000 ЕД полимиксина М, 1-2 мл 0,1% спиртового

раствора фурацилина. Разливают по 20 мл в чашки Петри (толстым

слоем).

- азидная среда Сланеца-Бкртли. В 1 л дистиллированной воды

растворяют ( при нагревании) 30-40 г скхого питательного агара, 4

г фосфата калия однозамещенного, устанавливают рН 7,0;

стерилизуют при 120°С 20 мин. Перед употреблением в расплавленный

и слегка остуженный агар на каждые 100 мл среды добавляют: 2 мл

дрожжевого экстракта, 1 г глюкозы, 0,04 г азида натрия, 1 мл 1%

водного раствора TTX. Смешивают и быстро разливают в чашки Петри

по 2 мл.

5. Для обнаружение патогенных энтеробактерий спользуется:

- селенитовый бульон. Бульон готовят из сухой среды Луйфсона по

прописи на этикетке. При необходимости ее можно приготовить

следующим образом. Основной раствол: в 1 л воды растворяют 7 г

фосфата натрия двуузамещенного безводного, 3 г фосфата натрия

однозамещенного, 5 г пептона и 4 г лактозы. Устанавливают рН не

выше 7,0. Стерилизуют при 112°С 30 мин. Перед началом работы 2 мл

10 % раствора стерильного кислого селенистокислого натрия.

Готовую среду разливают в стерильные пробирки по 5-7 мл.

- тетратионатный бульон Мюллера. К 90 мл стерильного мясопептонного

бульона добавляют 4,5 г стерильного мела, 2 мл раствора Люголя,

10 мл гипосульфата натрия. ( При приготовлении раствора Люголя к

20 мл дистиллированной воды добавить йодида калия 20 г, йода 25

г, а за тем долить до 100 мл воды). Среда предназначена для

накопления в материале сальмонелл.

- тетратионатная среда с бриллиантовым зеленым (среда Кауфмана). К

500 мл тетратионатной среды добавляют 25мл стерильрой жклчи и 5

мл 0,1%раствора бриллиантого зеленого. Среда служит для

накопления сальмонелл.

- трехсахарный агар с мочевиной по Олькеницкому. Среда является

дифференциально-диагностической. К 100 мл дистиллированной воды

добавляют 2,5 г сухого питательного агара, 1 г лактозы, 1 г

сахарозы, 0,1 г глюкозы, 1 г мочевины, 0,02 соли Мола, 0,03 г

тиосульфата натрия, 0,4 мл 0,4% водного раствора фенолового

красного. Все тщательно перемешивают, устанавливают рН 7,2-7,4,

разливают по пробиркам, стерилизуют текучим паром по 20 мин 3 дня

подряд. Среду скашивают, оставляя столбик высотой 5 см. Среда

после стерилизации бледно-розового цвета.

- среда Ресселя. К 100 мл 1,5 %мясопептонного агара добавляют 1

%лактозы, 0,1% глюкозы и 1 мл индикатора Андреде (кислый фуксин,

обесцвеченный едким натром) или смесь водного голубого и

розоловой кислоты. Устанавливают рН 7,2. Среду разливают в

пробирки, стерилизуют при 112°С 20 мин и скашивают, оставляя

столбик агара высотой 2-3 см.

6. Для обнаружение иерсиний используется

- буферная среда обогащения. Предварительно готовят растворы солей:

3 мл 1/15 М гидрофосфата натрия в 100 мл дистиллированной воды и

7 мл 1/15 М дигидрофосфата натрия, также в 100 мл. Затем

добавляют 8,5 г хлорида натрия, доводят общий объем воды до 1 л,

фильтруют, устанавливают рН 7,2, разливают в пробирки по 5-6 мл и

стерилизуют текучим паром 30 мин.

7. Среды для контроля стерильности:

- сахарный бульон Хоттингера. К мясному перевару Хоттингера (140-

160 мг % амминного азота) добавляют 0,5% хлорида натрия,

подщелачивают до рН 8-8,2 ( с помощью 10 % раствора едкого

натра), кипятят 10 мин и фильтруют через ватный фильтр. Затем в

среду вносят 1 % глюкозы, устанавливают рН 7,3-7,5, (с помощью 5

% хлористоводородной кислоты), фильтруют через бумажный фильтр и

разливают в стерильные колбы или пробирки. Стерилизация при 120°

С 30 мин.

- бульон Сабуро. В 1 л дистиллированной воды добавляют 10 г

пептона, кипятят 10 мин и фильтруют через бумажный фильт. Затем

добавляют 4% глюкозы (или мальтозы), устанавливают рН 5,7

разливают в стерильные колбы и пробирки. стерилизация при 112° С

30 мин.

- тиогликолевая среда. К 1 л дистиллированной воды добавляют 15 г

гидролизата казеина, 5 г дрожжевого экстракта, 2,5 г хлорида

натрия, 0,75 г цистина, 0,75 г агар-агара. Цистина предварительно

растворяют в небольшом количества воды (с помощью едкого натра).

Устанавливают рН смеси всех компонентов до 8-8,2, кипятят 5-10

мин до полного расплавления агара. Затем добавляют 5 г глюкозы и

0,3 мл тиогликолевой кислоты. Среду фильтруют, устанавливают рН

7,2-7,3 вносят 1 мл раствора резазурина натрия 1:1000,

перемешивают и разливают в стерильные пробирки. стерилизация при

120° С 20 мин.

Список литературы:

Актуальные вопросы эпидемиологии и инфекционных болезней. / Н. А.

Семина. – М.: Медицина, 1999

Внутрибольничная инфекция. / Шерертц, Хэмптон, Ристуцина. – Под ред. Р.

П. Венцела. – М.: Медицина 1990.

Внутрибольничная инфекция. / соавторами. – учебно-методическая пособия,

Иркутск, 1999. – 32 с.

Дезинфекционное дело. / Гандельсман Берта Израиловна. – Под ред. И. И.

Карон. – М.: Медицина, 1971

Медицинская микробиология / Под ред. акад. РАМН В.И. Покровского. – М.:

ГЭОТАР-МЕД, 2001. – стр.543-547

Медицинская микробиология. / Гл. ред. В.И. Покровсктй, О. К. Поздеев –

М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1998. – стр. 631-656

"Медицинская энциклопедия" РАМН 2001 Russ Portal Company Ltd.

Санитарная микробиология и вирусология./ З. Н. Качемасова, С. А.

Ефремова, А. М. Рыбакова – М.: Медицина, 1987. – 352 с.

"Справочник госпитального эпидемиолога". М.: Хризгостом, 1999

Эпидемиология внутрибольничной инфекций. / Р. Х. Яфаев, Л. П. Зуева. –

Ленинград: Медицина, 1989

Эпидемиологические особенности внутрибольничных инфекции в районах

Сибири и Крайнего севера. / Ратушняк С. С. – автореферат, Иркутск, 1999

Страницы: 1, 2, 3, 4